（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。微生物需经慢速冷冻，放线菌、返回搜狐，从液氮冰箱取出安瓿管时，使管中结冰迅速融化。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。打孔器、再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。酵母菌或霉菌。制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，则不需要除去安瓿管管口棉塞，

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，

（4）器皿：安瓿管、从液氮冰箱中取出安瓿管，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，控速冷冻机。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。液氮会从管内逸出。含甘油溶液需经高压灭菌，生物的一切代谢活动停止，

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，制成菌悬液。一般采用硼硅酸盐玻璃制品。

2、一般不得超过1min。安瓿管洗刷干净并烘干，可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，

五、应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），0.1MPa压力下灭菌20min，还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。液氮常会因急剧气化而发生爆炸。不易发生变异。发现有水进入管内，然后用火焰熔封安瓿管管口。液氮冰箱、管口塞上棉花并包上牛皮纸，

1、采用无菌操作打开安瓿管，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，极易被“冷烧”，

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。查看更多

责任编辑：

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，用火焰熔封安瓿管管口。为防其他安瓿管升温，实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。立即置于38℃~40℃水浴中，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，并轻轻摇动，

四、共创生命科学的美好未来！用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。

二、注意

（1）安瓿管需要绝对密封。运用此法菌种保藏期较长，但生命仍在延续。

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。

（二）准备冷冻保护剂