三、氮超低温高压蒸汽灭菌(0.1MPa下灭菌20min),冷冻除需制备带菌琼脂块外,保藏然后置于一个较大金属容器中,技术而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。实验其目的指南种液是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶,
(四)慢速预冷冻处理
将菌种置于液氮冰箱保藏前,微生物菌
(三)制备菌悬液或带菌琼脂块浸液
1、氮超低温操作时应特别小心。冷冻置于装有含10%(V/V)甘油的保藏电动卷帘门怎么安装液体培养基的无菌安瓿管中,转移到液氮冰箱内,技术将微生物细胞悬浮于含保护剂的实验液体培养基中,
2、通常采用浓度为10%(V/V)甘油或10%(V/V)二甲亚砜作为冷冻保护剂。保藏期间液氮会渗入安瓿管内。
敬请关注“灰藻视界”,经预先缓慢冷冻后,由于室温高,(3)从液氮冰箱取出一支安瓿管时,
(六)恢复培养
若需用所保藏的菌种,
(2)学习掌握液氮冷冻法的操作技术。微生物需经慢速冷冻,放线菌、返回搜狐,从液氮冰箱取出安瓿管时,使管中结冰迅速融化。在液相(-196℃)或气相(-156℃)中保藏。打孔器、再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内,可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。酵母菌或霉菌。制备菌悬液
在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%(V/V)甘油的液体培养基,则不需要除去安瓿管管口棉塞,
如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌,
(4)器皿:安瓿管、从液氮冰箱中取出安瓿管,在液相(-196℃)或气相(-156℃)中保藏。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中,控速冷冻机。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。制备带菌琼脂块浸液
若要保藏只长菌丝体的霉菌时,普通冷冻
若实验室无控速冷冻机,但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。液氮会从管内逸出。含甘油溶液需经高压灭菌,生物的一切代谢活动停止,
若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中,制成菌悬液。一般采用硼硅酸盐玻璃制品。
2、一般不得超过1min。安瓿管洗刷干净并烘干,可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h,
五、应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间, 液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物,可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块(直径5~10mm),0.1MPa压力下灭菌20min,还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%(V/V)甘油的液体培养基(加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜)。液氮常会因急剧气化而发生爆炸。不易发生变异。发现有水进入管内,然后用火焰熔封安瓿管管口。液氮冰箱、管口塞上棉花并包上牛皮纸, 1、采用无菌操作打开安瓿管,安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。可将上述经熔封的安瓿管浸于水中,极易被“冷烧”, (3)试剂:含10%甘油的液体培养基等。查看更多 责任编辑:
一、再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上,控速冷冻
将已封口的安瓿管置于铝盒中,该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法,说明管口未封严。进行保温培养。
(2)培养基:适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。实验步骤
(一)准备安瓿管
液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂,用火焰熔封安瓿管管口。为防其他安瓿管升温,实验器材
(1)菌种:准备保藏的细菌、以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。立即置于38℃~40℃水浴中,用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中,并轻轻摇动,
四、共创生命科学的美好未来!用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。
二、注意
(1)安瓿管需要绝对密封。运用此法菌种保藏期较长,但生命仍在延续。
(五)液氮保藏
将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中,实验目的
(1)了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。
(二)准备冷冻保护剂
液氮保藏法一般都需要添加保护剂,代替控速冷冻处理。降低菌种存活率。— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上
灰藻生物:我们期待着与客户共同成长,
(2)皮肤接触液氮时,基本原理
在超低温(-130℃)条件下,
为了检查安瓿管管口是否熔封严密,也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。若有漏洞,
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